Construction and confirmation of the plasmid of human mitochondrial DNA 4977 bp deletion induced by ionizing radiation

目的 建立电离辐射诱导的人线粒体DNA(mtDNA)4977 bp缺失片段和对照DNA片段的稳定质粒,用于线粒体基因组相关研究.方法对无mtDNA 4977 bp缺失的正常人外周血进行离体照射10 Gy60Co γ射线,提取细胞总DNA,用巢式PCR扩增mtDNA 4977 bp缺失片段,普通PCR扩增对照ND1基因片段.PCR产物经纯化后构建质粒;提取质粒DNA,DNA样品经酶切、纯化后测序,将测序结果进行BLAST分析.结果PCR扩增的跨mtDNA 4977 bp缺失的DNA片段和ND1基因片段大小与预期值是吻合的.对制备的质粒DNA样品进行测序,结果经BLAST分析,两种质粒DNA与人线粒体序列同源性在99%以上.结论本研究中所构建的质粒是成功的,可以用于人mtDNA4977 bp缺失的定性或定量研究。