Extração de peptídeos e quantificação de aminoácidos de PereskiaaculeataMiller (Ora-Pro-Nóbis) para ensaios antimicrobianos

Introducao: A hortalica ora-pro-nobis (OPN) - Pereskiaaculeata oferece multiplos beneficios ao ser humano. Considerada hortalica nativa de rico valor nutricional da regiao Sudeste, e nutraceutica e fonte potencial de substâncias bioativas, possuindo folhas tenras, grossas e de alto valor proteico, equiparado ao do caruru, da couve e do espinafre. Ha relatos na literatura da relacao do uso da OPN com a reducao do risco de incidencia de varias doencas como varizes, câncer de colon, tumores intestinais e diabetes, e poucos sao os dados relatados de peptideos de OPN com acoes antimicrobianas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi extrair peptideos, analisar a acao antimicrobiana e quantificar aminoacidos de OPN. Metodologia: Para extracao dos peptideos de interesse foram utilizados 2 diferentes metodos, sendo eles: extracao salina, utilizando solucao de NaCl 0,1 M, na proporcao de 1:20 (m/v) e extracao com solucao aquosa (agua destilada) seguida de solucao hidroalcoolica (30% e 70% de metanol). Para extracao com NaCl 0,1 M, a solucao foi adicionada as folhas secas e trituradas e estas foram maceradas manualmente com auxilio de almofariz e pistilo por 20 min, o extrato obtido foi filtrado e o sobrenadante foi liofilizado e armazenado. Para extracao com solucao aquosa seguida de solucao hidroalcoolica, as folhas secas e trituradas foram submetidas a agitacao, em mesa agitadora a 180 rpm por 10 min, com agua destilada na proporcao de 1:8 (m/v), o extrato foi filtrado, o sobrenadante foi estocado e o retido no filtro voltou a ser agitado novamente com agua destilada, repetindo-se o processo por 9 vezes. Ao final da extracao com solucao aquosa, o sobrenadante foi liofilizado e armazenado, e o retido no filtro ao final das 10 extracoes foi submetido a agitacao com solucoes hidroalcoolicas contendo 30% e 70% de metanol. Os extratos proteicos obtidos foram quantificados pelo metodo de Bradford. O fracionamento dos extratos em coluna de Extracao de Fase Solida (EFS) foi realizado para obtencao de diferentes fracoes, as quais foram hidrolisadas e analisadas em HPLC, bem como as amostras de folhas secas e trituradas. Para ensaios antimicrobianos, linhagens de bacterias e de fungos filamentosos foram utilizadas para analises in vitro. Resultados e Discussoes: A maior obtencao de proteinas foi observada quando utilizada extracao com solucao aquosa - 9,1% de proteina. As massas obtidas apos o fracionamento dos extratos em coluna de EFS indicaram que os materiais mais polares estao presentes nos extratos, tendo destaque para a extracao com solucao aquosa. Analises em HPLC indicaram a presenca de aminoacidos essenciais e elevada concentracao do aminoacido lisina, cerca de 10 vezes maior quando comparado com dados da literatura. Com relacao aos ensaios antimicrobianos, nao foram observadas acoes antimicrobianas frente aos organismos analisados. Conclusao: Os metodos de extracoes utilizados foram capazes de extrair quantidades consideraveis de proteinas e as analises de aminoacidos indicaram presencas de aminoacidos essenciais de grande interesse alimenticio, superando alguns dados encontrados na literatura