Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的树突状细胞瘤苗对肝细胞癌瘤内CD25＋Foxp3＋Treg细胞的影响

目的：观察注射Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的骨髓来源树突状细胞（bone marrowderived dendritic cells,BMDCs）瘤苗对小鼠肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）瘤内CD25＋叉头盒转录因子P3（forkhead box p3,Foxp3）＋调节T淋巴细胞（regulatory T cells,Tregs）浸润的影响.方法：在粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（granulocyte-macrophage colony stimulatingfactor,GM-CSF）和白介素-4（interleukin-4,IL-4）诱导下体外扩增BMDCs,使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白体外致敏BMDCs制备瘤苗,荧光免疫化学染色和FACS检测致敏前后BMDCs CD11c、CCR7、CD80和CD86的表达变化.使用Hepal-6细胞皮下注射的方法制备小鼠（C57BL/6J）HCC模型,成瘤小鼠分组注射Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗（足垫部和瘤内,每7 d注射1次,共2次）,并另设对照（空白对照组、BMDCs组和Hepal-6细胞裂解蛋白组）.在治疗结束后9 d获取组织标本,免疫荧光组织化学染色和FACS检测瘤苗注射后肿瘤内CD8＋T细胞和CD25＋Foxp3＋Tregs细胞的浸润情况.结果：光镜和扫描电镜显示：GM-CSF和IL-4在体外诱导扩增的BMDCs具有树突状细胞特征性的形态特征,且免疫细胞化学染色显示：该细胞表达CD11c,CCR7,CD80和CD86.使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs组,与对照组（BMDCs组和Hepal-6细胞裂解蛋白组）相比该组细胞CD11c（67.2±4.49 vs 52.4±5.20,58.4±4.43,P〈0.01）,CCR7（65.4±5.34 vs 45.9±5.04,57.0±3.46,P〈0.01）,CD80（62.9±4.69 vs 46.9±4.75,54.4±3.47,P〈0.01）和CD86（73.3±3.58 vs 60.1±2.98,63.7±3.10,P〈0.01）的表达均明显增高.使用Hepal-6细胞热休克后裂解蛋白致敏的BMDCs瘤苗为HCC荷瘤小鼠进行注射治疗,治疗后的检测结果显示：该组小鼠瘤内CD8＋T细胞的浸润明显高于对照组（空白对照组、BMDCs组和Hepal-6细胞裂解蛋白组）（55.0±4.11 vs 38.2±3.34,44.6±4.29,45.6±4.92,P〈0.01）,而同时瘤内