pEGFP-mINF-γ转染人卵巢癌细胞SKOV3及其对细胞生长的抑制作用
2010
目的构建绿色荧光蛋白联合γ干扰素(pEGFP-mINF-γ)真核表达质粒,探讨γ-干扰素对卵巢癌细胞系skov3细胞生长的影响。方法将重组质粒转染入卵巢癌细胞株skov3中,获得稳定表达INF-γ细胞株,设空质粒转染组(skov3-pEGFP组)和空白对照组(skov3组);逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法检测目的基因的表达,双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)方法测定INF-γ的分泌量;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法和荧光显微镜下细胞染色法检测INF-γ对skov3细胞体外生长和凋亡等生物学行为的影响。结果RT-PCR和ELISA法证实重组质粒已整合到skov3细胞并获稳定表达;MTT法检测细胞的增值速度及细胞抑制率,pEGFP-mINF-γ组第5天的细胞抑制率为21.67%,明显高于skov3-pEGFP和skov3组,P〈0.005;Hoechst染色检测结果显示skov3-mINF-γ组细胞凋亡,荧光显微镜下skov3-mINF-γ组凋亡细胞明显多于skov3-pEGFP组和skov3-nul组,差异有统计学意义(P〈0.05),skov3-pEGFP组和skov3组间差异无统计学意义(P〉0.05)。结论成功构建真核表达质粒pEGFP-mINF-γ,该质粒转染人卵巢癌细胞sk-ov3可抑制其生长,并不影响INF-γ的分泌量,异种INF-γ基因可能对人上皮性卵巢癌起重要作用。
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