Exploration du locus de la chaine légère kappa des immunoglobulines : caractérisation d'une nouvelle région régulatrice et identification de phénomène particulier de recombinaison

Un aspect original et peu etudie de l’expression des genes d’Ig a ete explore au cours de ce travail. A la difference de tres grandes revues dont le travail porte sur des modeles murins, notre etude concerne les processus d’induction de rearrangements de la chaine legere kappa dans des modeles cellulaires humains. Nous avons montre contre toute attente qu’il etait possible d’obtenir des rearrangements du locus kappa en absence d’elements regulateurs jusqu'alors decrits comme indispensables. Ainsi, l’activation de lignees B humaines presentant une deletion homozygote des enhancers conventionnels, par les memes inducteurs utilises chez la souris a savoir le LPS ou l’Il-1, permet d’induire une transcription germinale efficace et localisee au niveau de certain genes Vkappa (IGKV2-24, IGKV3-20 et IGKV6-21). Faisant suite a cette transcription germinale, surviennent dans des temps plus tardifs les premiers rearrangements conventionnels V-J et atypiques V-V avec une utilisation preferentielle remarquable d'un sous-groupe de segments V « clusterises » refletant l’existence possible d’un nouveau site d’ouverture du locus kappa, hypothese deja evoquee par Inlay M et Schlissel M. Nous avons baptise cette region potentiellement porteuse d'un nouvel enhancer, EVk. Nous avons identifie dans cette region EVk deux motifs de fixation pour les deux facteurs de transcription E2A et NFkB, facteurs dont le role dans l’activation des recombinaisons des genes des Ig est clairement etabli, et demontrer leur fonction dans l’induction de rearrangement de novo au locus kappa. Au cours de nos travaux, nous avons constate que les rearrangements conventionnels V-J et atypiques V-V sont les cibles frequentes de recombinaisons secondaires aux cours desquelles une partie d’un ou des deux genes Vk receveur(s) est remplacee par un autre gene Vdonneur. L’analyse des sequences de ces compositions mosaiques revele deux elements troublants: d’une part la presence de sequence WRCY a la jonction des genes receveur et donneur, qui suggere l’intervention possible de l’enzyme activating-induced deaminase (AID) dans l’initiation de ces processus secondaires de recombinaison; d’autre part la conservation de petites sequences homologues entre les genes donneurs et receveurs a cette meme jonction suggerant l’intervention d’un processus de reparation par micro-homologie. La question qui s'est alors imposee etait l'eventualite de la mise en jeu d'un mecanisme similaires a la conversion genique et au dela, le role potentiel de la region EVk dans ce phenomene de recombinaison. Le modele que nous avons utilise nous a permis de confirmer la non-implication d’AID dans ce processus repondant ainsi a la controverse sur la possible contribution d’AID dans le processus de remplacement de type 2.