Fe3O4/ethylenediaminetetraacetic acid magnetic beads-based integrated method for proteomic analysis

建立了基于Fe 3 O 4 /乙二胺四乙酸（EDTA）磁性粒子的集成化蛋白质组学研究方法。首先用共沉淀法合成EDTA负载的Fe 3 O 4 /EDTA磁性粒子。在优化的溶液条件下（95%乙腈-1%三氟乙酸，体积分数），100μg Fe 3 O 4 /EDTA磁性粒子可吸附12.4μg牛血清白蛋白（BSA），吸附容量是商品化磁珠的10倍左右。以BSA作为标准蛋白质，对所合成的Fe 3 O 4 /EDTA磁性粒子作为蛋白质组学反应器的酶解时间进行了优化，发现Fe 3 O 4 /EDTA磁性粒子处理BSA酶解1、8和16 h的肽段序列覆盖率和特征肽段结果相当。因此，可以将复杂的蛋白质样品前处理时间缩短至2 h内。最后，将所合成的Fe 3 O 4 /EDTA磁性粒子应用于血清的蛋白质组学研究，成功地鉴定出218种蛋白质，其中包含了41种美国食品药品管理局（FDA）认证的生物标志物。所发展的基于Fe 3 O 4 /EDTA磁性粒子的蛋白质组学样品前处理方法将蛋白质样品预富集、还原、烷基化、酶解、多肽除盐和洗脱等步骤集成到一起，减少了样品转移和处理所造成的损失。这种技术具有快速、灵敏和易于操作的特点，可用于临床蛋白质组学研究。