Produção de MIP-1alfa e SDF-1 por fibroblastos de polpa dental humana em cultura frente ao desafio com Enterococcus faecalis inativado por calor

A polpa dental e formada de tecido conjuntivo frouxo sendo constituida por diversas celulas, dentre as quais os fibroblastos sao as mais numerosas. Ao serem submetidas a agressoes diversas, estas celulas respondem com a liberacao de substâncias, tais como citocinas e quimiocinas, que participam de maneira ativa no processo inflamatorio. Assim sendo, este trabalho teve como proposicao: 1. avaliar a capacidade de fibroblastos de polpa dental humana em cultura em produzirem as quimiocinas MIP-l'alfa' /CCL3 e SDF-1/CXCL12; 2. avaliar a producao destas quimiocinas pelos fibroblastos quando estimulados por Enterococcus faecalis morto por calor com relacao a quantidade de bacterias por celula e 3. avaliar a liberacao destas quimiocinas com relacao ao tempo de estimulo. Para o estabelecimento das culturas, foi coletada a polpa de terceiro molar higido de um paciente saudavel. O tecido foi extraido, armazenado e picotado em meio de cultura para fibroblastos (DMEM), os quais foram utilizados a partir da quarta passagem. Apos adesao das celulas a placas de 24 pocos, o meio de cultura contendo Enterococcus .faecalis morto por calor numa concentracao correspondente a 1, 10 e 100 bacterias por fibroblasto foi adicionado aos pocos. Apos 1, 6 e 24 horas, o sobrenadante das celulas foi coletado para a analise por ELISA. A analise estatistica foi realizada aplicando-se o teste Kruskal-Wallis com nivel de significância de 5%. A producao de MIP-l'alfa' /CCL3 e SDF-l/CXCL12 pelas celulas pode ser detectada por ELISA. Os fibroblastos pulpares se mostraram capazes de produzir SDF-1 constitutivamente sendo que o estimulo bacteriano levou a uma diminuicao estatisticamente significativa desta producao. A producao de MIP-l'alfa' tambem foi detectada tanto de maneira constitutiva como em resposta ao desafio microbiano. Enquanto a concentracao intermediaria de bacteria por fibroblasto (10:1) mostrou uma producao semelhante ao grupo controle, as concentracoes de 1 e 100 bacterias por fibroblasto induziram aumento maior na primeira hora de estimulo. Essas diferencas, entretanto, nao foram estatisticamente significativas. A capacidade dos fibroblastos secretarem quimiocinas, como MIP-l'alfa' e SDF-1, reforca a importância dessas celulas dentro do contexto de imunidade e inflamacao pulpar, principalmente por serem as celulas mais numerosas deste microambiente. (AU)