大豆 GmMYB46 基因的克隆、定位及表达分析

目的本文旨在研究MYB类转录因子基因 GmMYB46 的结构特征和定位，并阐述其对不同胁迫的响应，为明确其在逆境胁迫下的作用奠定基础。 方法从大豆品种‘晋豆21’中克隆出 GmMYB46 的CDS序列，采用生物信息学方法对该基因及其编码蛋白进行分析，并利用PlantCARE软件分析 GmMYB46 基因启动子元件。通过洋葱表皮细胞瞬时表达系统对GmMYB46蛋白质全长及不同结构域M1（aa1~123）和M2（aa124~334）进行亚细胞定位分析。采用实时荧光定量PCR检测 GmMYB46 在不同逆境处理下的表达情况。 结果 GmMYB46 CDS序列全长为1 005 bp，编码334个氨基酸，蛋白质相对分子质量为82.53×10 3 ，氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域。进化树分析表明该基因编码的蛋白与野生大豆GsMYB46亲缘关系最近。 GmMYB46 包含MBS、ABRE、GARE、TCA、LTR等逆境胁迫应答元件。亚细胞定位结果显示，pBIN- GmMYB46 -GFP及pBIN- GmMYB46M1 -GFP融合蛋白在细胞核中表达，pBIN- GmMYB46M2 -GFP绿色荧光遍布整个细胞。实时荧光定量PCR分析表明，在干旱、盐（200 mmol·L -1 NaCl）、低温（4℃）、ABA（200 μmol·L -1 ）、SA（500 μmol·L -1 ）、GA（100 μmol·L -1 ）处理下均能诱导 GmMYB46 基因在大豆根、茎、叶中的上调表达。 结论 GmMYB46 基因的保守结构域对亚细胞定位起决定性作用，该基因可能参与大豆对非生物胁迫的响应。