hVEGF165 及hBMP-7 共表达重组腺相关病毒载体体内诱导成骨及成血管研究

目的 探讨hVEGF165 及hBMP-7 共表达重组腺相关病毒（recombinant adeno-associated virus，rAAV）体内诱导成骨及成血管的活性，为股骨头缺血性坏死（avascular necrosis of the femoral head，ANFH）的AAV 基因治疗提供理论基础。 方法 取体外培养的第3 代兔BMSCs，分别采用以下4 种病毒转染并分为4 组：rAAV-hVEGF165- 内部核糖体进入位点序列（internal ribosome entry site，IRES）-hBMP-7（A 组）、rAAV-hVEGF165- 绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）（B 组）、rAAV- hBMP-7-GFP（C 组）及rAAV-IRES-GFP（D 组）。取24 只雄性新西兰大耳白兔制作后肢缺血模型，并随机分为4 组（n=6），于股骨肌肉内植入上述4 组病毒转染的BMSCs，8 周后应用超声影像学检测兔后肢胫前动脉血流量，行CD34 免疫组织化学染色检测微血管生成。另取24 只雄性新西兰大耳白兔制作股骨肌袋模型，并随机分为4 组（n=6），于肌袋内植入上述4 组病毒转染的BMSCs，8 周后应用X 线片检测兔后肢原位骨化，行von Kossa 钙盐染色检测肌肉组织成骨矿化。 结果 病毒注射后动物未出现局部或全身毒性反应。病毒注射后8 周，A 组兔后肢胫前动脉血流百分比及CD34 阳性微血管数均高于其他3 组，差异有统计学意义（P lt; 0.05）；B 组高于C、D 组，差异有统计学意义（P lt; 0.05）；C、D 组间比较差异无统计学意义（P gt; 0.05）。病毒注射后8 周，A、C 组兔后肢肌袋内出现可被X 线检测到的原位骨化，von Kossa 肌肉组织钙盐染色可见大量钙盐沉积，且A 组原位骨化及钙盐沉积程度均较C 组强；B 组及D 组均未见明显原位骨化及钙盐沉积形成。 结论 rAAV-hVEGF165-IRES-hBMP-7 载体具有体内诱导成骨及成血管的生物学活性。