Otimização do ensaio de azul cresil brilhante visando à seleção qualitativa de oócitos bovinos derivados de ovários submetidos a diferentes temperaturas e tempos de transporte

O sucesso da producao in vitro de embrioes (PIVE) depende da qualidade de oocitos imaturos, os quais sao normalmente selecionados de acordo com a morfologia oocitaria. Contudo, esse metodo e subjetivo e alternativas vem sendo propostas, como o ensaio de azul cresil brilhante (Brillant Cresyl Blue – BCB). Assim, o objetivo foi verificar as condicoes de incubacao do BCB, quanto ao tempo de exposicao ao corante (15 vs. 40 vs. 60 vs. 90 min), concentracao (15 vs. 20 vs. 26 μM) e diluidor (NaCl vs. PBS vs. DPBS). Adicionalmente, esse ensaio foi empregado para avaliar a qualidade de oocitos colhidos de ovarios transportados em diferentes temperaturas (25°C vs. 35°C) e tempos (2 h vs. 10 h). Em todos os experimentos, oocitos recuperados por aspiracao folicular foram classificados por criterios morfologicos e, em seguida, incubados com o BCB de acordo com as condicoes a serem avaliadas. Todos os dados foram analisados pelo teste exato de Fisher (P<0,05), considerando quatro repeticoes por experimento. Assim, o tempo de exposicao, a concentracao e o diluidor do BCB que apresentaram as maiores taxas de oocitos viaveis foram 60 min (64,9%) e 90 min (73,4%), 26 μM (59,6%) e PBS (49,2%). Em ambos os ensaios de qualidade oocitaria, nenhuma diferenca foi observada nas taxas de oocitos viaveis oriundos de ovarios transportados em diferentes temperaturas. Embora nenhuma diferenca tenha sido observada na qualidade oocitaria entre os tempos de transportes de ovarios de acordo com os criterios morfologicos, o ensaio de BCB indicou uma reducao dessa qualidade de oocitos de ovarios transportados por 10 h (51,2%), quando comparado a 2 h (69,6%, P<0,05). Assim, para o ensaio de BCB, foi estabelecido o tempo de incubacao de 60 min, na concentracao de 26 μM e com o diluidor PBS para a selecao de oocitos bovinos imaturos. Alem disso, foram observados melhores resultados com ovarios transportados a 35°C ate 2 h de transporte.