Efeito do óxido nítrico sobre a atividade da NTPDase1 e da Ecto-5’-nucleotidase em células musculares lisas de aorta de ratos

Introducao: A Hipertensao Arterial Sistemica (HAS) e responsavel por cerca de 7 milhoes de mortes prematuras em todo mundo e, na maioria dos casos, a dificuldade na identificacao de suas causas se traduz na complexidade do seu tratamento, o qual consiste basicamente, em tratar os fatores de risco associados a essa patologia. A sinalizacao purinergica possui grande relevância como reguladora da fisiopatologia cardiovascular. Sabe-se que o ATP, o ADP e a adenosina estimulam a vasoconstricao, o vasorelaxamento, a agregacao plaquetaria, entre outros processos. A ativacao dos receptores purinergicos do tipo P2 em celulas musculares lisas vasculares (CMLV) induz a producao de oxido nitrico (NO), com consequente vasoconstricao. As ectonucleotidases sao enzimas responsaveis pela hidrolise extracelular dos nucleotideos. Na vasculatura, destacam-se a NTPDase1, abundantemente expressa em CMLV, responsavel pela conversao de ATP e ADP em AMP; e a ecto-5’-nucleotidase , a qual hidrolisa o AMP, originando adenosina, uma molecula reconhecidamente vasodilatadora. Em um trabalho previo mostramos que as atividades ectonucleotidases foram diminuidas em soro e em plaquetas de ratos hipertensos pelo tratamento com LNAME, um inibidor da enzima oxido nitrico sintase (NOS). Mostramos ainda que os niveis sericos de ADP, AMP e hipoxantina apresentaram-se paradoxalmente diminuidos nestes animais. Objetivo: Determinar o efeito do NO sobre a atividade das enzimas NTPDase1 e ecto-5’-nucleotidase em CMLV de aorta de ratos.  Metodologia: As CMLV foram obtidas a partir da porcao toracica da aorta de ratos Wistar e cultivadas ate atingirem confluencia de 90% em terceira passagem. Em seguida, foram tratadas com agentes inibidores (LNAME), mobilizadores (ATP, ADP, AMP e BK), e doadores (SNP) de NO. As atividades enzimaticas foram avaliadas utilizando-se ATP, ADP ou AMP como substratos e detectadas pelo fosfato inorgânico (Pi) liberado na reacao, utilizando-se o reagente verde de malaquita para deteccao. As proteinas totais foram determinadas pelo metodo de Bradford. Resultados e discussao: As culturas primarias de CMLV foram obtidas com alto grau de pureza, em torno de 95%, como evidenciado pela tecnica de imunofluorescencia para o marcador especifico desse tipo celular (calponina). Resultados preliminares indicam uma maior atividade enzimatica nas CMLV tratadas com L-NAME, um agente inibidor de NO, em media 3x maior quando comparadas a CMLV tratadas com SNP, um agente doador de NO, para todos os substratos testados (ATP, ADP e AMP). Conclusao: uma possivel modulacao na atividade das enzimas NTPDase1 e ecto-5’- nucleotidase pelo NO pode modificar a taxa de remocao dos nucleotideos circulantes, influenciando na protecao dos individuos hipertensos contra o aumento na agregacao plaquetaria e formacao de trombos, possibilitando o aparecimento de abordagens terapeuticas adicionais no tratamento e prevencao dessa patologia.