纤维蛋白原α链剪切位点IVS2＋1G〉C突变导致的遗传性低纤维蛋白原血症

目的：探讨遗传性低纤维蛋白原（Fg）血症的分子发病机制。方法：检测凝血指标以明确诊断；用DNA直接测序法对患者Fg基因FGA、FGB和FGG的所有外显子及其侧翼序列进行测序以寻找基因突变，对有突变的序列反向测序证实；通过逆转录结合巢式PCR扩增的方法，检测患者外周血中的Fg异位转录产物；构建含有突变点的突变型FGA小基因（minigene）质粒和野生型FGA小基因质粒，将2种质粒分别转染人胚肾（HEK）293T细胞，抽提RNA．逆转录PCR（RT—PCR）后TA克隆测序。结果：先证者呈FGA基因剪切位点IVS2＋1G〉C杂合突变；对于该突变，逆转录结合巢式PCR的产物经克隆后测序只检测到正常转录本，而没有发现异常转录本：突变型FGA小基因质粒转染HEK293T细胞后．抽提RNA再经RT-PCR、TA克隆、测序，揭示剪接过程中发生了FGA基因2号内含子滞留，导致终止密码的提前出现．从而使异常转录的mRNA在体内很快被降解。结论：异位转录结合体外表达证明先证者FGA基因剪切位点IVS2＋1G〉C突变导致异常转录mRNA在体内很快被降解，是先证者低Fg血症的原因之一。