His／GST—HDAC1在大肠杆菌中表达的研究

目的：对His／GST—HDAC1在大肠杆菌BL-21中的表达进行研究。方法：HDAC1的完整基因片断被克隆到pColdI载体和pGD（载体上，并在其N末端分别联有His和GST；采用大肠杆菌BL21对HDAC1进行表达；采用亲和色谱对HDAC1进行纯化：用SDS—PAGE和蛋白质印迹来验证表达和纯化效果；对HDAC1活性进行测定。结果：多数HDAC1存在于大肠杆菌BL-21细胞裂解液的沉淀组分和纯化过程中的未结合组分中，小部分HDAC1可从细胞裂解液的上清液中得以纯化，但未显现出酶活性。用FPLC对HDAC1进行进一步分离，结果表明，HDAC1发生了分子聚集，使得它们的分子量大于正常分子量。结论：活性His／GST—HDAC1不能用大肠杆菌BL21成功表达。