Estudo de fatores de transcrição envolvidos em Leucemia Mielóide Crônica
2012
Na leucemia mieloide cronica, a proteina produzida pelo gene hibrido bcr-abl e uma enzima anormal denominada tirosino quinase. Quando o gene abl se funde com o gene bcr, o resultado e uma proteina mais alongada que a proteina produzida pelo gene abl normal. Essa proteina funciona de maneira anormal e leva a uma regulacao do crescimento e da sobrevivencia celular. A hipoxia e um agente estressor que, em varias linhagens celulares de origem tumoral, pode causar importantes alteracoes na expressao genica, levando ao bloqueio no ciclo celular, apoptose e necrose. Entretanto, em alguns tipos de celulas tumorais, a hipoxia pode causar alteracoes celulares que resultam em um fenotipo mais agressivo. O cloreto de cobalto e um agente mimetizante da condicao hipoxial, induzindo apoptose e/ou parada no ciclo celular em diferentes tipos de celulas. Por outro lado, a diminuicao na biodisponibilidade de ferro mediante o uso de quelantes, como a deferoxamina ou outros, produzem eventos semelhantes uma vez que o ferro e componente essencial das proteinas que transportam ou “sentem” a concentracao de oxigenio disponivel. Estudos recentes sugerem um aumento de expressao do gene CELF2 em celulas leucemicas tratadas com quelantes de ferro. No entanto, seus efeitos e mecanismos exatos da morte ou sobrevivencia em celulas leucemicas nao estao claros. Porem, e conhecido que a proteina CELF2 esta envolvida no ciclo celular e que sua ativacao atua na parada pela ativacao da via do gene cox2 e prostaglandina. Assim, possivelmente o gene CELF2 esteja envolvido na regulacao deste mecanismo de parada do ciclo celular em LMC (Leucemia mieloide cronica), na literatura especializada encontram-se poucos estudos sobre este gene. Este trabalho visa a analise da expressao do gene CELF2 em celulas leucemicas da linhagem K562 sob o tratamento com CoCl2 e deferoxamina, bem como a determinacao de possiveis fatores de transcricao envolvidos no controle da expressao deste gene. Para isso, foi analisado por metodos de genomica comparativa, cinco mil nucleotideos que antecedem a regiao do inicio de transcricao do gene CELF2 de Homo sapiens sapiens e Mus musculus a partir das sequencias depositadas no banco de dados (NCBI). As sequencias foram salvas em formato Fasta em linhas de 80 nucleotideos e analisadas no software rVISTA. Foi possivel observar uma grande “conservacao” na regiao -500 a +200 entre especies de mamiferos e tambem com outras especies de vertebrados sugerindo a importância evolutiva da conservacao nos mecanismos de regulacao da sua expressao. A partir destes dados foram desenhados primers para amplificar as regioes -1000 a +200, -750 a +200, -500 a +200 e -250 a +200, aproximadamente. A amplificacao de cDNA com estes primers foi exitosa com bandas especificas no tamanho esperado, os testes com PCR em tempo real mostram-se bons durante amplificacao. Atualmente estamos trabalhando na clonagem dos fragmentos do promotor amplificados por PCR.A eletroporacao do plasmideo bicolor que sera usados para caracterizar a sequencia do promotor do gene CELF2 foi exitosa. Estes dados preliminares obtidos podem contribuir de forma significativa para o conhecimento do complexo sistema de regulacao exercido pelo gene CELF2.
- Correction
- Cite
- Save
- Machine Reading By IdeaReader
0
References
0
Citations
NaN
KQI