腺病毒介导的 MAT 2B过表达促进猪肌内脂肪细胞分化

本研究旨在通过构建腺病毒介导的体外超表达载体，探究腺苷甲硫氨酸转移酶（MAT2B）对猪肌内脂肪细胞分化的影响。本研究以猪脂肪组织为试验材料，提取总RNA，并反转录得到cDNA，参考GenBank收录的猪 MAT 2B基因mRNA序列设计引物，PCR扩增并连接到腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV，进行测序鉴定。结果表明，构建的穿梭载体与骨架载体pAdEasy-1可以实现同源重组，即腺病毒重组载体pAd-MAT2B构建成功；用 Pac Ⅰ限制性内切酶酶切线性化pAd-MAT2B载体并回收质粒大片段转染293A细胞可以实现病毒的成功包装，病毒滴度测定可满足原代细胞侵染需要。转染猪原代肌内脂肪细胞后， MAT 2B的mRNA和蛋白水平实现了显著的上调。油红O染色结果表明，过表达 MAT 2B促进了肌内脂肪细胞脂质积累；实时定量结果证明， MAT 2B促进成脂标志基因 PPARγ 和 aP 2表达的显著上调。综上所述，腺病毒介导的体外表达载体可以成功的实现 MAT 2B基因超表达； MAT 2B正向调控猪肌内脂肪细胞分化。