农杆菌介导的携带 egfp 基因载体转化寡雄腐霉

目的寡雄腐霉（ Pythium oligandrum Drechsler）是一种对动、植物和环境无害，兼具杀菌和增产效果的生防真菌。通过研究建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系。 方法选用EHA105、AGL-1、LBA4404三种农杆菌菌株对寡雄腐霉进行遗传转化研究，通过对影响遗传转化效果的条件参数试验优化，确立适宜寡雄腐霉遗传转化的农杆菌菌株及转化条件，建立农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系。 结果经研究发现，所选3种农杆菌菌株中EHA105菌株对寡雄腐霉的遗传转化效果最好，其次是AGL-1菌株，LBA4404菌株转化效果不好。EHA105菌株经IM（含300 μmol/L AS）诱导培养至 OD 600 =0.6时，与浓度为10 6 -10 7 个/mL的寡雄腐霉孢子悬浮液以1-10：1的比例混合，在25-26℃以液体振荡的方式避光共培养72 h（pH 5.0，含300 μmol/L AS），寡雄腐霉菌体液体振荡恢复培养24 h，涂布抗性选择平板筛选寡雄腐霉转化子，即可得到寡雄腐霉基因工程菌株，其转化率可达到130个转化子/10 6 个孢子。 结论本研究首次构建了农杆菌介导的寡雄腐霉遗传转化体系，研究结果可为寡雄腐霉的生防机制及分子育种研究提供技术支撑。