RNA干扰HIF-1α对食管鳞癌细胞Eca-109抑制效应的体内体外表达分析

目的：探讨分析RNA干扰缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）对食管鳞癌细胞Eca-109抑制效应的体外及体内的表达情况。方法选取研究用Eca-109细胞，设计RNA干扰片断h-EGFR构建重组质粒pGensil-1-EGFR转染目的基因片段。测定EGFR蛋白/mRNA表达，挑选转染成功的基因修饰细胞株分别植入裸鼠体内，构建移植瘤模型，且随机分为未转染组与实验组。运用免疫组化技术检测各组裸鼠HIF-1α蛋白表达，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测各组HIF-1αmRNA表达，最后测量裸鼠移植瘤的重量及体积。结果 Eca-109中HIF-1α蛋白伴随氯化钴浓度的升高而升高。并且HIF-1α蛋白水平在缺氧后12小时升高，24小时后降低，且持续减少。转染后EGFR mRNA的阳性表达率为26.55%、9.48%、4.60%，依次降低，P＜0.01。其中EGFR siRNA水平最低。转染后EGFR mRNA阳性表达率为24.30%、34.11%、34.05%，与未转染组（78.27%）相比显著降低（P＜0.01）。经RT-PCR分析，实验组裸鼠EIF-1αmRNA表达较少，与未转染组相比差异无显著性（P＞0.05）。实验组裸鼠HIF-1α蛋白表达的灰度值显著低于未转染组（P＜0.01）。接种1周后裸鼠均出现肿瘤，实验组裸鼠移植瘤体积为（0.20±0.13）cm^3，重量为（0.21±0.05）g，均显著少于未转染组。结论 HIF-1α蛋白的表达与氯化钴浓度及缺氧有关，RNA干扰缺氧诱导的HIF-1α只发生在蛋白水平，而非基因水平， RNA干扰技术可以成功抑制食管鳞癌细胞HIF-1α基因，阻碍肿瘤细胞生长、增殖，降低肿瘤恶性程度，值得临床应用与推广。