DESARROLLO DE UNA TÉCNICA DE qPCR PARA LA DETERMINACIÓN DE PATÓGENOS EN AGUAS UTILIZANDO Escherichia coli COMO MICROORGANISMO MODELO

Evaluar la calidad microbiologica de diferentes tipos de agua es indispensable para definir si esta apta para su uso, dentro de los parametros definidos se ha establecido la determinacion de microrganismo indicadores y en muy pocas ocasiones se busca la presencia de patogenos, esto ultimo a razon de que se encuentran en muy bajas concentraciones en este tipo de muestras y por ende los metodos para su deteccion son muy  laboriosos, de alli la necesidad de implementar tecnicas mas rapidas y que a la vez sean sensibles y especificas, dentro de ellas se encuentran los metodos moleculares como la PCR, la cual ademas permite la cuantificacion de estos microrganismos a traves de la variante en tiempo real. El presente trabajo tuvo como objetivo desarrollar un metodo para la enumeracion de Escherichia coli en muestras de agua, para ello se estandarizo el procedimiento de concentracion y elucion bacteriana con diferentes tipos de buffer y tiempos de agitacion con vortex y el procedimiento  de extraccion de ADN directo a partir de un filtro por el metodo de Cloroformo: alcohol isoamilico, se elaboro una curva de calibracion que relaciono el numero de UFC y valor de Ct y se validara el metodo analitico en muestras de agua de mar y agua potable. Los resultados obtenidos muestran que es posible la recuperacion bacteriana de las muestras de agua a traves de la filtracion y se logro la separacion mecanica de las celulas a partir del filtro usando buffer glicina:peptona durante 10 minutos, la curva de calibracion UFC/Ct demuestra un coeficiente de correlacion Pearson de 0,9947.  Los resultados obtenidos hasta el momento evidencian que es posible la implementacion de esta tecnica en la cuantificacion de E. coli en muestras de agua.