斜纹夜蛾气味结合蛋白基因 GOBP2 转录调控区的克隆及活性分析

目的本文旨在鉴定重要农业害虫斜纹夜蛾（Spodoptera litura）气味结合蛋白基因GOBP2的顺式作用元件，为揭示GOBP2的转录调控机制和开发基于嗅觉干扰的害虫防治技术奠定基础。 方法利用5'RACE技术克隆GOBP2的5'UTR，确定转录起始位点；利用染色体步移技术（chromosome walking）克隆GOBP2的5'侧翼区，并利用在线网站预测转录因子结合位点；利用PCR克隆GOBP2的5'侧翼区逐步缺失片段，并构建到pGL3-Basic载体上；将各重组载体分别转染Sf9细胞，48 h后收获细胞并利用双荧光素酶报告系统检测转录活性。 结果获得斜纹夜蛾GOBP2长23 bp的5'UTR，由此确定GOBP2的转录起始位点。通过染色体步移获得斜纹夜蛾GOBP2的5'端调控区2 025 bp的序列，发现启动子的典型TATA框；针对-1 000 bp序列的转录活性分析表明，最强转录活性区域位于-243~-207 bp，具有1个增强子；此外，在-971~-891 bp及-890~-811 bp各有1个增强子，在-244~-315 bp存在1个沉默子。 结论获得斜纹夜蛾GOBP2的转录起始位点及顺式作用元件，为进一步研究GOBP2的转录调控机制奠定了基础。