IL-6对肝细胞癌患者CD8 + T淋巴细胞程序性死亡受体1表达和功能的影响

目的  观察血浆IL-6及程序性死亡受体(PD-1)在肝细胞癌(HCC)患者外周血CD8+T淋巴细胞中的表达，评估IL-6对HCC患者CD8+T淋巴细胞中PD-1表达和功能的影响。 方法  纳入2019年1月—2019年9月期间在陕西省人民医院或空军军医大学第二附属医院(第四军医大学唐都医院)就诊的HCC患者44例(HCC组)，同时纳入年龄和性别匹配的健康对照者19例(HC组)，采集外周血，分离血浆和外周血单个核细胞，分选CD8+T淋巴细胞，ELISA法检测血浆IL-6水平，流式细胞术检测PD-1在CD8+T淋巴细胞中的表达水平。使用IL-6中和抗体刺激分选的CD8+T淋巴细胞24 h，CCK-8法检测细胞增殖，ELISA法检测培养上清IFNγ和TNFα水平，实时定量PCR法检测穿孔素、颗粒酶B和颗粒溶素mRNA相对表达量，Western blot法检测STAT3和Src磷酸化水平。计量资料两组间比较采用t检验或配对t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。 结果  HCC组患者血浆IL-6水平较HC组显著升高[(99.67±20.92)pg/mL vs (81.05±16.76)pg/mL，t=3.427，P=0.001 1]。虽然CD3+CD8+T淋巴细胞比例在HCC组和HC组患者之间的差异无统计学意义(P＞0.05)，但PD-1+CD8+细胞比例在HCC组患者中显著升高(3.79%±1.36% vs 2.20%±0.47%，t=5.335，P＜0.000 1)。使用IL-6中和抗体抑制HCC组患者CD8+T淋巴细胞的IL-6虽不影响细胞增殖，但可降低PD-1表达(2.67%±0.91% vs 3.33%±1.12%，t=2.177，P=0.035)，增加IFNγ分泌[(13.50±3.82)pg/mL vs (10.82±1.37)pg/mL，t=3.170，P=0.002 8]，穿孔素和颗粒酶B mRNA相对表达量亦显著升高(t值分别为6.161、14.140，P值均＜0.000 1)，同时伴有磷酸化STAT3水平降低(P＜0.000 1)。 结论  抗人IL-6中和抗体可能通过增加穿孔素和颗粒酶B水平、增强细胞因子分泌以及抑制PD-1表达增强HCC患者CD8+T淋巴细胞的功能。