Sirt1通过去乙酰化NF-κB/p65减轻小鼠肺泡II型上皮细胞脂多糖损伤

目的研究酵母沉默信息调节因子2相关酶1(sirtuin type 1, Sirt1) 在肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)脂多糖(LPS)损伤中对NF-κB的作用。 方法购买Sirt1过表达(Tg)小鼠和野生型(WT)小鼠，饲养、繁殖、鉴定新生小鼠基因型; 通过qRT-PCR和Western blot鉴定Tg小鼠和WT小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白表达差异；两种不同Sirt1基因背景的小鼠LPS(15 mg/kg)腹腔注射12 h后，HE染色鉴定肺组织病理变化差异；分离纯化两种小鼠的AECⅡ并进行鉴定；两种不同Sirt1基因背景的AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后, 分别在0、2、4、6、8、12、24 h用ELISA检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6) 和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)的水平；用LPS 10 μg/mL处理两种AECⅡ，同时设置生理盐水对照组，12 h后用Western blot鉴定细胞NF-κB/p65蛋白和乙酰化NF-κB/p65蛋白的表达差异。 结果新生小鼠有Tg和WT两种不同的基因型；Tg小鼠肺组织Sirt1 mRNA和蛋白的表达水平显著高于WT小鼠( P ＜0.05)；小鼠腹腔注射LPS 15 mg/kg 12 h后肺组织病理变化显示，Tg小鼠较WT小鼠肺组织损伤程度轻；两种AECⅡ用LPS 10 μg/mL处理后，细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平随时间推移呈现逐渐升高的趋势，Tg组AECⅡ细胞上清液中IL-6和TNF-α的表达水平在多个时间点都显著低于WT组( P ＜0.05);两种AECⅡ经LPS(10 μg/mL)处理后，与各自的空白对照组相比Sirt1含量下降，且WT组AECⅡ下降更明显，LPS处理后WT组AECⅡ的NF-κB/p65和乙酰化NF-κB/p65的变化倍数均高于Tg组。 结论Sirt1可能通过去乙酰化NF-κB/p65参与调控AECⅡ LPS炎症损伤，抑制急性呼吸窘迫综合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)小鼠肺部炎症反应。