Caracterización de la respuesta inmune y estudio de los mecanismos de inmunosupresión en el intestino de terneros inoculados con el virus de la diarrea vírica bovina

El objetivo de este trabajo fue caracterizar las lesiones y la distribucion de antigeno en el ileon distal de teneros no encalostrados e inoculados con la cepa no citopatica 7443 del virus de la diarrea bovina (DVB), y determinar la relacion espacial y temporal entre la deplecion linfoide, macrofagos expresando citoquinas, cambios cuantitativos y expresion de citoquinas por los linfocitos T, asi como el papel de las celulas dendriticas. Para ello se tomaron muestran del ileon distal de 8 terneros no encalostrados que fueron sacrificados en grupos de os a los 3, 6, 9 y 14 dias post-inoculacion (dpl). 2 animales fueron empleados como controles. Las muestras fueron procesadas de forma rutinaria para su estudio histopatologico, inmunohistoquimico y ultraestructural. Para el estudio inmunohistoquimico se empleo la tecnica de la avidina-biotina.peroxidasa. La antigeno cirico se evidencio con el anticuerpo monoclonal 15C5 (gp48). Distintos anticuerpos se emplearon para la identificacion de las poblaciones macrofagicas (Mac-398), linfocitos B (CD79, Ki79), subpoblaciones de linfocitos T (CD3, CD4, CD8, WC1), celulas dendriticas (anti S100 y anti-CDF), celulas reticulares (anti-vimentina) y celulas productoras de citoquinas (TNF-a, IL-6, IFN-? e IL-4). Las celulas en apoptosis se estudiaron mediante el empleo de las tecnicas de TUNEL y caspasa 3. Desde los 3 dpi se observo una progresiva deplecion linfoide de las placas de Peyer., acompanado de un incremento de la apoptosis. Estos cambios se vieron acompanados del aumento de macrofagos fagocitando restos celulares a medida que avanzaba la experiencia. Desde los 3 dpi, el estudio inmunohistoquimico senalo a las celulas dendriticas y monocitos-macrofagos en los foliculos linfoides, como las principales celulas blanco del virus, alcanzandose a los 9 dpi el maximo de celulas infectadas. La infeccion de los linfocitos fue escasa y de aparicion tardia. Los resultados obtenidos sugieren que la accion directa del virus y de las citoquinas liberadas por los macrofagos en foliculos y areas interfoliculares, jugarian un papel secundario en la apoptosis linfocitaria. La infeccion virica de las celulas dendriticas y reticulares induciria cambios morfologicos que podrian alterar los procesos de presentacion de antigeno provocando la apoptosis de los linfocitos B. A pesar de la deplecion linfoide, se produjo un incremento de linfocitos T activos (CD3+) desde los 3 dpi dentro de los foliculos, principalmente CD4+ y desde los 6 dpi de CD8+ y gd. Se observo, desde los 3 dpi, un incremento significativo de IL-4 frente a IFN?, que se incremento en fases finales de la experiencia, evidenciando una lteracion de la respuesta Th1/Th2. Estos cambios producirian una lateracion en la proliferacion y transformacion blastica de los linfocitos B, contribuyendo a su apoptosis masiva.