Padronização da técnica de análise quantitativa da aglutinação de diferentes mananoligossacarídeos a linhagens de E. Coli patogênicas

O objetivo deste estudo foi padronizar uma tecnica quantitativa para avaliar a capacidade in vitro de aglutinacao de diferentes mananoligossacarideos (MOS) a cepa de Escherichia coli isoladas de casos de diarreia infantil, de criancas de 0 a 5 anos de vida. A pesquisa para a expressao da fimbria tipo 1 presente nos isolados foi realizada pelo teste de microhemoaglutinacao. Para realizacao dos ensaios de aglutinacao de oligossacarideos utilizou-se tres marcas comerciais de MOS, extraidos de S. cerevisae, grupos 1, 2 e 3, filtrados atraves de um microfiltro, posteriormente diluidos para semeadura superficial em Agar cromogenico E. coli. Para avaliacao microscopica da capacidade aglutinante do MOS foram submetidas a testes de aglutinacao em lâmina.Para estimar a contagem bacteriana total (CBT), calculou-se a media das contagens do conjunto de tres placas. Pressupostos de homogeneidade de variâncias e normalidade de dados foram validados, respectivamente, pelo teste de Levene e Shapiro-Wilk. Variaveis homocedasticas foram comparadas por analise de variância em uma via (ANOVA one-way), com contrastes pelo metodo de Tukey. Variaveis heterocedasticas foram comparadas com ANOVA one-way com aplicacao da correcao de Welche contrastes pelo metodo de Games-Howell. As correlacoes entre CBTs, Titulos hemaglutinantes, diâmetros e areas dos globulos foram avaliados pelo teste de correlacao de Pearson. Todas as analises foram conduzidas no software R, considerando-se probabilidade de erro tipo 1= 5%. Das 30 cepas testadas, 25 (83,3%) expressaram capacidade hemaglutinante com titulos variando entre 1:4 e 1:16. Os resultados sugerem que o MOS apresentou acao efetiva na aglutinacao das bacterias, visto que as estimativas de CBTs das cepas tratadas com MOS foram inferiores as contagens da amostra pura. O grau de aglutinacao pode variar segundo a composicao do MOS, visto que o produto 1 apresentou CBTs superiores aos demais, denotando que os globulos aglutinados nao foram capazes de reter bacterias nos poros dos filtros de forma similar aos produtos 2 e 3.Observou-se correlacao significativa e negativa entre a hemaglutinacao sensivel a manose e aglutinacao de MOS para os produtos 1 e 2, o que sugere que intensidade da aglutinacao por bacterias pode estar relacionada a expressao de fimbrias do tipo 1. Conclui-se que a tecnica de filtragem e cultura pode ser utilizada para avaliar diferentes graus de aglutinacao de produtos a base de MOS e a quantidade de bacterias retidas nos filtros parece estar relacionada mais com a expressao de fimbrias tipo 1 mano-sensiveis do que com os tamanhos dos globulos produzidos.