与CYPOR共表达CYP2D6^＊1和CYP2D6^＊10及其代谢活性比较

细胞色素P450 2D6（cytochrome P450 2D6,CYP2D6）是一种重要的氧化代谢酶,呈基因多态性,对药物的代谢呈现明显的个体差异和种族差异,CYP2D6＊10在中国人群中的发生率高达51.3%。采用杆状病毒昆虫表达系统,采用与细胞色素氧化还原酶（cytochrome oxidoreductase,CYPOR）共表达的方式获得具有代谢活性的CYP2D6＊1/CYP2D6＊10,并初步研究其催化右美沙芬的代谢活性差异。构建重组质粒pFastBac-CYP2D6＊1,pFastBac-CYP2D6＊10和pFastBac-CYPOR,并分别转化DH10Bac菌株构建重组Bacmid-CYPOR,Bacmid-CYP2D6＊1和Bacmid-CYP2D6＊10,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒用于病毒扩增和感染Sf9昆虫细胞。通过测定混悬蛋白催化右美沙芬的速率来优化重组CYPOR和CYP2D6病毒感染Sf9昆虫细胞的感染复数（multiplicity of infection,MOI）值和其比例,获得活力较高的重组CYP2D6＊1和CYP2D6＊10。重组CYP2D6＊1催化右美沙芬的Km为（26.67±2.71）μmol·L-1（n=3）,Vmax为（666.7±56.78）pmol·nmol-1（CYP2D6）·min-1（n=3）,清除率为25.0;CYP2D6＊10催化右美沙芬的Km为（111.36±10.89）μmol·L-1（n=3）,Vmax为（222.2±20.12）pmol·nmol-1（CYP2D6）·min-1（n=3）,清除率为2.0。利用杆状病毒昆虫细胞系统表达的重组CYP2D6＊1和CYP2D6＊10代谢药物具有活性差异,可用于体外研究其催化某些药物的代谢差异,这有助于理解药物代谢的个体差异、预测药物之间的相互作用。