Expressão do gene heterólogo cry1Ab em bactéria diazotrófica endofítica e colonizadora de cana - de - açúcar

O desenvolvimento da biologia molecular permitiu que novos produtos biotecnologicos fossem desenvolvidos. Com isso genomas foram sequenciados e seus genes identificados e manipulados. Concomitantemente, o sequenciamento do genoma da bacteria diazotrofica endofitica Gluconacetobacter diazotrophicus, abriu novas perspectivas para estudos relacionados a sua genomica e seu uso como vetor de expressao de genes heterologos. O presente trabalho tem o objetivo de inserir no genoma de G. diazotrophicus o gene cry1Ab, isolado de B. thuringiensis subsp. kurstaki estirpe S76. Este gene e responsavel pela producao da delta-endotoxina Cry1Ab, letal para a broca da cana-de-acucar. A primeira etapa deste trabalho consistiu na sub-clonagem do gene nos vetores comerciais pGEM-T easy e pCC1. Para clonar o gene foi usada a tecnica de PCR com iniciadores especificos para o gene cry1Ab e presenca de sitios XhoI  para facilitar a ligacao do fragmento amplificado nos plasmideos. O produto amplificado no tamanho de 3,5 Kb foi ligado com sucesso nos vetores comerciais. A proxima etapa consiste na sub-clonagem do gene cry1Ab no plasmideo pTnMod-OGmGusA. Este novo plasmideo sera inserido em Escherichia coli DH10B pela tecnica de eletroporacao com o objetivo de avaliar a capacidade da bacteria expressar a proteina heterologa Cry1Ab. Baseado na producao da proteina, a construcao sera transferida para G. diazotrophicus para avaliar a capacidade da mesma em produzir a delta-endotoxina.