5HRE联合PCEA调节TSST-1／CD80TM重组基因表达的逆转录病毒载体的构建

目的：构建5个拷贝的缺氧反应元件（5HRE）增强子和癌胚抗原启动子（PCEA）联合调控超抗原-中毒性休克综合症基因（TSST-1）与CD80分子跨膜序列（CD80TM）融合基因的逆转录病毒表达载体。方法：设计引物应用PCR法分别从人直肠癌基因组克隆P。，从野生株金黄色葡萄球菌基因组克隆TSST-1全长基因。利用重叠PCR法从pCMV—SPOR—T6-CD80载体克隆融合有中性linker的CD80TM基因片段。选择pLEGFP-N1为原始逆转录病毒表达载体，选取合适的酶切位点SphⅠ和BglⅡ，联合双酶切和PCR方法去除原始载体中巨细胞病毒即刻早期启动子（PCMV IE）。将上述基因片段与去除了PCMV IE的pLEGFP-N1重组，构建携带5HRE、PCEA、TSST-1、linker—CD80TM基因的逆转录病毒表达载体。结果：成功克隆PCEA和TSST-1基因。构建了融合中性linker的CD80TM，测序与预期相符。将上述片段重组到载体pLEGFP．N1上，酶切鉴定和DNA序列分析无误。结论：成功构建了逆转录病毒表达载体pLEFGP-N1-5HRE-PCEA-TSST-1-linker—CD80TM，为下一步的体外实验奠定了基础。