梨 DEFL 基因家族的鉴定与表达分析

[目的]本文旨在对梨的类防御素（DEFL）基因家族成员进行鉴定，分析其序列特性、进化关系、基因结构、氨基酸序列保守功能域、染色体定位和在梨中的表达特性，为PbrDEFL功能研究和应用奠定基础。[方法]基于梨的全基因组数据，采用生物信息学方法进行序列鉴定和分析；通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术和转录组数据分析PbrDEFL成员在各组织中和花粉管发育阶段的表达模式。利用亚细胞定位技术分析PbrDEFL38与PbrDEFL15在细胞中的分布情况，并且进一步分析PbrDEFL38与PbrDEFL15重组蛋白在大肠杆菌原核表达纯化过程中所需的最佳条件。[结果]梨中包含39个PbrDEFL基因（PbrDEFL1-PbrDEFL39），可分为2个组，均存在稳定的半胱氨酸αβ模型（CS αβ motif），且在9条染色体上呈不均匀分布，在进化过程中主要受纯化选择作用。RT-qPCR结果表明，PbrDEFL在各组织中表达且具有特异性，主要集中在花粉或叶片中；此外，在‘砀山酥梨’和‘黄花’2个梨品种花粉发育过程中，超过60%的PbrDEFL基因表达量均呈先升高后下降的趋势。PbrDEFL蛋白亚细胞定位预测均位于胞外，并通过PbrDEFL38-GFP和PbrDEFL15-GFP在烟草细胞中表达得到证实。通过不同浓度IPTG筛选，最终确定在15℃和IPTG终浓度为0.5 mmol·L-1时，PbrDEFL38和PbrDEFL15蛋白表达量最高。[结论] PbrDEFL基因家族成员高度保守，主要在胞外起重要作用，其不仅在植物免疫防御过程中发挥重要作用，还可能参与了梨花粉管生长发育和自交不亲和过程。