放线菌素D诱导非洲绿猴肾细胞(Vero)凋亡模型的建立

用不同剂量（0，0．25，0．5，1．0，2．0，4．0mg／L）的放线菌素D（actinomycinD，ActD）诱导Vero 细胞凋亡不同时间（0，12，24，36，48，60h）。MTT法和流式细胞术的结果显示，以未处理的细胞作为对照组，各剂量ActD处理Vero细胞不同时间后，细胞的活力均下降，凋亡率均升高，且呈剂量和时间依赖效应。当ActD浓度为1mg／L、作用时间为36h，细胞的存活率为（0．55±0．01），凋亡率为（34．83±1．13）％。Gimesa染色、Hoechst33258染色表明，经ActD（1mg／L）诱导36h后Vero细胞形态学发生明显改变，出现膜小泡和凋亡小体形成等凋亡细胞特征：Real-timePCR结果显示，诱导组Bax／Bcl-2mRNA相对含量明显大于正常对照组，且差异有统计学意义；分光光度法结果表明，与正常对照组相比较，凋亡诱导组caspase-3和caspase-8活性明显升高且差异具有统计学意义，caspase-9活性与对照组相比较，差异无统计学意义。用lmg /L ActD诱导Vero细胞36h时，细胞存活率和凋亡率都很高，可作为ActD诱导Vero胞的最佳剂量。在该剂量及作用时间下，caspase-3和caspase-8活性明显升高，表明ActD诱导Vero细胞凋亡是通过caspase-8相关的途径。该实验成功建立了ActD诱导非洲绿猴肾细胞凋亡模型，将有助于进一步探讨目的基因在Vero细胞凋亡作用的的分子机制。