Diketopiperazines from Alternaria dauci

Abstract. Alternaria dauci is the causal agent of Alternaria leaf blight (ALB), a foliar disease of carrot crops (Daucus carota) around the world. In terms of phytotoxic metabolites production, A. dauci has received limited attention. Previous studies carried out on the secondary metabolites involved in the pathogenicity of this fungus have only reported the isolation of a ubiquitous non-selective phytotoxin known as zinniol. Because of this, the aim of this research is directed towards the isolation and identification of secondary metabolites involved in the plant-pathogen interaction process. A. dauci was cultured in the Czapek-Dox medium, and the culture filtrate was extracted with ethyl acetate. The leaf-spot assay of fractions resulting from the partition process showed a phytotoxic effect in the ethyl acetate fraction. The chromatographic separation of ethyl acetate fraction allowed the isolation of seven diketopiperazines, identified as cyclo-(pro-val) (1), cyclo-(pro-leu) (2), cyclo-(pro-phe) (3), cyclo-(val-leu) (4), cyclo-(val-phe) (5), cyclo-(leu-phe) (6) and cyclo-(leu-tyr) (7). The structures of the different metabolites were established by comparing their spectroscopic (1H NMR) and spectrometric (GC-MS) data with those reported in the literature.   Resumen. Alternaria dauci es el agente causal del tizon de la hoja (ALB), una enfermedad foliar que afecta los cultivos de zanahoria (Daucus carota) alrededor del mundo. En terminos de produccion de metabolitos fitotoxicos, A. dauci ha recibido una atencion muy limitada. Estudios previos llevados a cabo sobre los metabolitos secundarios involucrados en la patogenicidad de este hongo, solo han reportado el aislamiento de una fitotoxina no selectiva y ubicua conocida como zinniol. Debido a lo anterior, el objetivo de esta investigacion se dirige al aislamiento e identificacion de metabolitos secundarios implicados en la interaccion planta-patogeno. Para esto el fitopatogeno se cultivo en medio Czapek-Dox y el filtrado del cultivo se extrajo con acetato de etilo. La evaluacion de las fracciones resultantes de la particion, en el ensayo de manchas foliares en hojas, mostro un efecto fitotoxico en la fraccion de acetato de etilo. La separacion cromatografica de la fraccion de acetato de etilo permitio el aislamiento de siete dicetopiperazinas identificadas como ciclo-(pro-val) (1), ciclo-(pro-leu) (2), ciclo-(pro-phe) (3), ciclo-(val-leu) (4), ciclo-(val-phe) (5), ciclo-(leu-phe) (6) y ciclo-(leu-tyr) (7). Las estructuras de los diferentes metabolitos se establecieron comparando sus datos espectroscopicos (1H RMN) y espectrometricos (CG-EM) con los reportados en la literatura.