Rapid identification of Meloidogyne chitwoodi, M. hapla, and M. fallax using PCR primers to amplify their ribosomal intergenic spacer

Summary - Primers used to amplify the InternaI Transcribed Spacer (lTS) were reoriented divergently and used to amplify the genomic rDNA intergenic spacer erGS) region of M. chuwoodi via the polymerase chain reaction. The location of the IGS within the resulting 5.8 kilobase pair DNA fragment was identified by subcloning individual restriction fragments and sequencing their terminal regions. Additional primers were constructed which could amplify the IGS with only minimal flanking sequences of the 28S and 18S rDNA. Agarose gel electrophoresis of amplified fragments obtained from PCR amplification of DNA from M. chuwoodi, M. hapla, and M. fallm: demonstrated size polymorphisms. Direct identification of nematodes based On size polymorphisms of an amplified product is more efficient than the usual procedure of amplification followed by digestion with restriction endonucleases. Resume -Identificationrapide de Meloidogyne chitwoodi, M. hapla et M. fallaxpar utilisation d'amorces d'amplifi­ cation en chaine par pol)t1nerase en vue d'amplifier leurs espaces intergeniques - Des amorces servant a amplifier la region interne transcrite de l'espaceur (lTS) ont ete reorientees de maniere divergente pour amplifier par reaction en chaine par polymerase (PCR) "espaceur intergenique erGS) de l'ADNr genomique de Meloidogyne chuwoodi. La position de l'IGS dans le fragment d'ADN obtenu de 5,8 Kb a bien ete identifiee en sous-clonant individuellement des fragments de restriction et en sequencanr leurs regions terminales. Des amorces additionnelles ont ete construites pour amplifier l'IGS avec un minimum de sequences des genes 28S et 18S de l'ADNr. Les fragments amplifies par PCR de j'ADN de M. chuwoodi, M. haplaet de M.fallm: ont montre des tailles differentes par electrophorese sur gel d'agarose. L'identification directe des nematodes a partir de differences de raille des fragments amplifies est plus efficace que la methode usuelle d'amplification suivie de digestion a l'aide d'enzymes de restriction.