人pEGFP-C2-PRDX3真核表达载体构建与在人髓母细胞瘤DAOY细胞中表达

目的构建人pEGFP-C-PRDX3真核表达载体，并检测其在人髓母细胞瘤DAOY细胞中的表达。方法从人髓母细胞瘤DAOY细胞中提取总RNA，采用RT-PCR法对编码PRDX3的基因片段进行扩增，应用基因重组技术，将目的片段亚克隆到pEGFP-C2真核表达载体，经PCR、酶切和测序鉴定后，用脂质体法将重组质粒转染入DAOY细胞，分别采用RT-PCR法、West-ernblot法检On．0PRDX3在DAOY细胞中的表达。结果双酶切及测序结果验证PRDX3片段正确插入pEGFP-C2质粒，转染后的PRDX3基因mRNA及蛋白质水平均明显上调。结论成功构建了具有报告基因一增强绿色荧光蛋白（EGFP）基因的真核表达载体pEGFP-C2-PRDX3，为进一步研究PRDX3基因在人髓母细胞瘤中的生物学功能奠定了基础。