三疣梭子蟹腺苷酸转移酶(ANT)基因的克隆与分析

腺苷酸转移酶（Adenine nucleotide translocase,ANT）是线粒体内膜上负责能量分子传导的转运蛋白,在能量代谢中起着关键作用。为了研究ANT基因在甲壳动物蜕皮中的作用,采用RT-PCR和c DNA末端快速扩增技术（RACE技术）克隆得到三疣梭子蟹ANT基因的序列全长（Gen Bank登录号：KM921660）,该序列全长1 414 bp,包括132 bp的5＇端非编码区,352 bp的3＇段非编码区,具有930 bp的完整开放阅读框（ORF）,编码309个氨基酸。将该ANT基因序列推导的氨基酸序列与已公布的其他物种ANT序列进行系统进化树分析发现,三疣梭子蟹ANT基因与其他甲壳动物ANT基因聚为一支,其中与拟穴青蟹ANT一致性高达96%。通过氨基酸序列比对发现,三疣梭子蟹ANT序列具有3个保守的线粒体穿膜功能结构域,是形成能量分子传导的转运通道,催化细胞质中ADP和线粒体内ATP间进行跨膜交换。采用实时荧光定量PCR技术,分析三疣梭子蟹ANT基因的组织差异表达,结果表明ANT基因在三疣梭子蟹肌肉（Ms）中的表达量最高,在其他组织中表达量均较低,具显著差异（P〈0.05）;在三疣梭子蟹蜕皮周期中,肌肉中ANT基因的表达量A期最高（P〈0.05）,然后下降,至C期最低,随后又逐渐上升至D1期,在D1期出现第2个峰值后再逐渐下降。研究结果说明ANT基因与三疣梭子蟹肌肉活动密切相关,可能在蜕皮调控中发挥重要作用。