Desarrollo y validación de una PCR múltiple para el diagnóstico de Bordetella spp.

El objetivo del trabajo consistio en disenar y validar una PCR en formato convencional que permita confirmar la presencia o ausencia de Bordetella pertussis y detectar otras especies del genero, como Bordetella parapertussis y Bordetella bronchiseptica, que pudieran estar involucradas en el cuadro clinico de coqueluche. A tal fin se diseno una reaccion en cadena de la polimerasa (PCR) multiple que amplifica una secuencia del promotor del gen de Toxina Pertussis y otra del gen de la Toxina Adenilato Ciclasa-Hemolisina. Se valido la metodologia siguiendo esquemas publicados anteriormente. Se optimizaron las condiciones de la PCR. Se valido la metodologia obteniendose un limite de deteccion para ambas secuencias de 0,5 bacterias por reaccion. Se valido, ademas, la especificidad y robustez de la tecnica. Se presenta una nueva herramienta diagnostica optimizada y validada, que permite detectar la presencia de las especies de Bordetella mas frecuentemente involucradas en el cuadro clinico de coqueluche. Su uso combinado con alguna de las PCR habituales en diagnostico, como la PCR IS481, permite aumentar la sensibilidad del diagnostico de esta enfermedad, la especificidad del mismo discriminando los resultados falsos positivos/negativos y aumentar el conocimiento sobre los agentes etiologicos implicados en esta patologia