Papel del Factor de Transcripción EB (TFEB) en la entrada de Acinetobacter baumannii en el huésped

Motivacion: El sistema endosoma/lisosoma esta implicado en procesos fundamentales tales como la secrecion, reparacion de la membrana plasmatica, senalizacion y en el metabolismo energetico(1).El factor de transcripcion EB (TFEB) forma parte de este sistema (2) y podria estar implicado en la entrada y la persistencia de Acinetobacter baumannii en el huesped mediante la activacion del mismo. A.baumannii es un agente infeccioso de gran importancia clinica que esta asociado con las infecciones nosocomiales (3). Hasta el momento no hay trabajos realizados para observar dicho proceso. El objetivo de este estudio es determinar el papel del TFEB en la entrada y la persistencia de A.baumannii en el huesped mediante el silenciamiento del ARN del TFEB y su sobreexpresion in vitro. Metodos: Se utilizaron celulas epiteliales de pulmon humano (A549) que fueron infectadas con la cepa A.baumannii (ATCC 17978 con 10 8 ufc/ml) para observar los diferentes objetivos del proyecto. Para todos los ensayos en primer lugar se cultivaron las celulas A549 en placas con medio de cultivo completo durante 24 h para realizar ensayos de silenciamiento, expresion y sobreexpresion del TFEB. Para efectuar el silenciamiento del ARN del TFEB o su sobreexpresion se realizo una transfeccion con el siRNA del TFEB o con un plasmido pEGFP-N1-TFEB durante 48 o 24 h, respectivamente, y luego realizamos ensayos de adherencia e invasion bacteriana en las celulas A549 durante 2 h. La expresion del TFEB se determino por Westerm Blot. Tambien se llevo a cabo ensayos de inmunomarcaje con diferentes anticuerpos para observar las diferencias de expresion del TFEB entre celulas infectadas y no infectadas durante 30 y 120 min. Resultados: Se observo que el silenciamiento del ARN del TFEB disminuye la entrada bacteriana en las celulas epiteliales (64% vs. control). Todo lo contrario en el caso de la sobreexpresion del TFEB que vimos que hay una mayor invasion bacteriana (266% vs. control). Referente a los ensayos de expresion del TFEB vemos un aumento progresivo de la expresion del TFEB tras 30 y 120 min de la infeccion con respecto a las celulas que no han sido infectadas. Conclusiones: Los resultados obtenidos en este estudio permiten concluir que el TFEB esta implicado en la entrada de A.baumannii en el huesped. Esto puede abrir nuevos caminos para encontrar inhibidores de estas vias y asi poder evitar las infecciones causadas por este tipo de bacterias, puesto que hoy en dia es un patogeno resistente.