Study on the Dsb protein genes expression of Chlamydia trachomatis

目的 研究3种二硫键(dsb)异构酶基因dsbB、dsbD、dsbG在沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)发育周期内的表达水平,探讨它们同Ct不同发育形式包括原体(EB)及始体(RB)的关系.方法 以25 cm2细胞培养瓶培养小鼠成纤维细胞L2,待L2细胞长成致密单层后,用Ct血清型F/IC-Cal-13感染,感染后每4 h收获一次细胞,提取总RNA,用基因特异性引物反转录后,RT-PCR分别扩增dsb基因转录的cDNA,将产物在DNA凝胶成像系统内检测,半定量分析cDNA产量,从而分析Ct发育周期内3种dsb基因的表达水平.结果 在感染后12 h开始检测到dsbG表达,16 h开始检测到dsbB、dsbD表达.所不同的是dsbG在感染后12 h开始,表达一直上升,持续维持在较高水平直到整个发育周期完成,EB释放.dsbB表达水平较低,于28 h达到高峰,随后下降;dsbD表达水平介于dsbB和dsbG之间,与dsbB相似,dsbD的表达于24～28 h达峰值,随后下降.结论 在Ct的发育周期中,同一时间点dsbB、dsbD、dsbG的表达水平存在差异;就每一种dsb而言,不同时间点的表达水平也不同.总体上,Ct发育的早期阶段(由EB到RB),Dsb蛋白参与的程度不高,dsbG的转录在感染后12 h开始,并稳定上升,直到完成整个发育周期;而dsbB、dsbD则在感染后16 h开始表达并于20～28 h出现峰值,然后下降直到感染后40h.以上3种Dsb蛋白,有可能在Ct的感染及发育过程中起作用。