Construction of murine IL-12 eukaryotic expression plasmid of single chain fusion gene and its potential in gene therapy of cancer

目的 构建小鼠IL-12单链融合基因(msIL-12),进行基因治疗初探. 方法用RT-PCR法从小鼠腹腔巨噬细胞总RNA分别获取p40cDNA和p35cDNA,2次PCR引入linker后,依次克隆入pcDNA3质粒,构建成msIL-12真核表达质粒(pmsIL-12);用DEAE-dextran法将PEG纯化的pmsIL-12转染COS-7细胞,用ELISA法检测其培养上清(转染上清)IL-12蛋白含量.皮内注射PEG纯化的pmsIL-12,用MTT法检测其对正常小鼠脾细胞NK活性的影响,观察其对荷H22腹水型肝癌细胞瘤小鼠生存期的影响. 结果所得p35cDNA序列与GenBank登录号M86672完全一致;所得IL-12p40cDNA序列与GenBank登录号AH004859报道完全相同,除第1000位碱基是G而不是A(但所编码氨基酸相同,都是丝氨酸)外也与GenBank登录号M86671报道相同.成功构建了小鼠IL-12单链融合基因真核表达质粒pmsIL-12,其转染COS-7细胞后的转染上清IL-12蛋白含量达(2.55±0.60)ng/ml.皮内注射pmsIL-12后,使正常小鼠脾细胞NK活性显著增强(P＜0.01),使荷H22肝癌细胞瘤小鼠的生存期明显延长(P＜0.05). 结论构建了小鼠IL-12单链融合基因的真核表达质粒,可用于基因治疗研究。