Etudes physico-chimique et structurale de l'hemoproteine hasa de serratia marcescens, une nouvelle voie d'acquisition du fer

L'hemoproteine hasa est secretee en conditions de carence en fer par serratia marcescens. Elle permet a cette enterobacterie, consideree comme un pathogene opportuniste, de croitre en presence d'heme ou d'hemoglobine comme seule source de fer. Elle ne presente aucune homologie de sequence avec d'autres proteines connues, si ce n'est avec deux proteines recemment identifiees (hasap et hasapf). Hasa est la premiere et la seule proteine bacterienne extracellulaire impliquee dans un systeme d'acquisition de l'heme a etre caracterisee. C'est un monomere de 19 kda (187 residus) qui fixe l'heme avec une stoechiometrie de 1 et avec une tres forte affinite. Elle est secretee par son extremite c-terminale via la voie de secretion abc (atp binding cassette) dependante. Aucune structure en solution de proteine secretee par cette voie n'a ete determinee a ce jour. L'etude structurale de hasa par rmn 1h nous a apporte des renseignements sur la conformation du signal de secretion c-terminal et le mode de secretion par la voie abc dependante. La structure entiere de hasa est etudiee par rmn heteronucleaire. Le marquage isotopique de la proteine a ete realise et l'analyse des spectres tridimensionnelles heteronucleaires ( 1 3c- 1 5n- 1h) nous a permis d'identifier des elements de structures secondaires. La connaissance de la structure de hasa nous permettra de mieux comprendre le mecanisme de capture et de liberation de l'heme impliques dans cette nouvelle voie d'acquisition du fer.