SALMONELLA GALLINARUM: ORIGEM E DIVERSIFICAÇÃO DE SURTOS RECENTES NO SUL DO BRASIL

Tifo aviario e pulorose sao doencas aviarias causadas por Salmonella enterica subsp. enterica do sorotipo Gallinarum ( S . Gallinarum). Bacterias deste sorotipo sao divididas em dois biovares: Gallinarum (associada ao tifo aviario) e Pullorum (associada a pulorose). No Brasil, o Programa Nacional de Sanidade Avicola (PNSA) foi implementado nos anos 90 para controlar os principais patogenos de aves, tendo sido eficaz na reducao de S. Gallinarum entre 1994-2006. No entanto, mais de cem casos de tifo aviario foram relatados no Brasil recentemente. Entre as possibilidades para explicar esta situacao destacam-se (i) a falha na biosseguridade nas granjas avicolas e (ii) a reversao da virulencia da principal vacina viva (cepa SG9R) que foi intensamente utilizada para controlar S . Gallinarum. O objetivo deste estudo foi utilizar testes de biologia molecular e metodos filogeneticos para investigar as linhagens de S . Gallinarum de surtos recentes no Brasil. As amostras consistiram de doze isolados de S. Gallinarum obtidos de lotes de aves com tifo aviario e pulorose no Sul do Brasil entre 2013 e 2014. Os metodos de analise de todos isolados incluiram (i) a deteccao especifica dos biovares Gallinarum / Pullorum e da cepa SG9R pela tecnica de PCR e ii) a amplificacao e sequenciamento da regiao intergenica do operon rrnH (ribotipagem). O genoma completo de um dos isolados (BR_RS12) foi sequenciado pela plataforma MiSeq (Illumina) e apos analisado comparativamente com dados de sequencias de outras cepas para a construcao de arvore filogenetica e avaliacao de distância com base no numero de polimorfismos de nucleotideos unicos (SNPs). Os resultados demonstraram que seis isolados eram do biovar Gallinarum e seis do biovar Pullorum. Nenhum isolado apresentou resultado positivo para a cepa vacinal SG9R. A ribotipagem revelou maior diversidade nos isolados do biovar Pullorum, enquanto os seis isolados do biovar Gallinarum foram identicos. A filogenia baseada em SNPs concatenados de genomas completos demonstrou que o isolado BR_RS12 apresenta diferenca significativa da cepa vacinal SG9R (260 SNPs). Ja um isolado caracterizado em um episodio de reversao vacinal na Belgica (MB4523) apresentou apenas doze SNPs de diferenca com a cepa SG9R. Estas doze alteracoes foram avaliadas in sillico nos outros genomas e os dois isolados brasileiros (287/91 e BR_RS12) apresentaram exatamente o mesmo padrao entre si e com outras cepas de campo, diferindo da cepa vacinal e revertente. Estes resultados sugerem que a origem das cepas associadas ao tifo aviario no Sul do Brasil provavelmente nao sao uma reversao recente da cepa vacinal SG9R. Em conclusao, a nossa analise comparativa auxilia na compreensao dos surtos de tifo aviario no Brasil, relacionando estes episodios a falhas de programas de biosseguridade nas granjas avicolas.