Influence of estrogen and progestin on nm23-H1 expression in epithelial ovarian cancer cell lines via activation of phosphorylation signaling

目的 探讨雌、孕激素激活磷酸化信号传导通路后,对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞转移抑制基因nm23-H1蛋白表达的影响.方法 采用不同浓度的17β雌二醇(雌激素组)及醋酸甲羟孕酮(孕激素组)分别作用于卵巢透明细胞癌细胞株ES-2细胞,以二甲基亚砜作为对照(对照组).采用划痕实验观察各组细胞迁移能力的变化;采用穿膜小室(Transwell小室)体外侵袭实验观察各组细胞侵袭能力的变化;采用蛋白印迹法检测各组细胞nm23-H1蛋白表达及蛋白激酶B(AKT)蛋白、磷酸化蛋白激酶B(pAKT)蛋白表达的变化及其与时间、剂量的相关性;采用RNA干扰技术观察转染AKT小分子干扰RNA(siRNA)质粒后,各组细胞nm23-H1蛋白表达的变化及其侵袭能力的变化.结果 划痕实验24 h时,各组ES-2细胞均向划痕处弥合,划痕间距雌激素组为(1.39±0.08)mm,孕激素组为(1.96±0.07)mm,对照组为(1.65±0.12)mm;雌激素组明显小于对照组(P=0.029),而孕激素组明显大于对照组(P=0.014).Transwell小室培养12 h时,穿过微孔膜的细胞雌激素组为(119±13)个,孕激素组为(78±8)个,对照组为(92±16)个;雌激素组明显多于对照组(P=0.015),而孕激素组明显少于对照组(P=0.006).蛋白印迹法检测结果显示,17β雌二醇降低ES-2细胞nm23-H1蛋白表达的作用与剂量和时间呈明显负相关关系(P=0.020,P=0.001),醋酸甲羟孕酮增加ES-2细胞nm23-H1蛋白表达的作用与剂量和时间呈明显正相关关系(P=0.003,P=0.002);17β雌二醇增加ES-2细胞pAKT蛋白表达的作用与剂量和时间呈明显正相关关系(P=0.001,P=0.007),醋酸甲羟孕酮降低ES-2细胞pAKT蛋白表达的作用与剂量和时间呈明显负相关关系(P=0.012,P=0.039);而17β雌二醇和醋酸甲羟孕酮对ES-2细胞AKT蛋白的表达均无明显影响(P》0.05).AKT siRNA 干扰后,减弱了17β雌二醇对ES-2细胞nm23-H1蛋白表达的降调节作用(P=0.076)和促进ES-2细胞穿过Transwell小室的能力(P=0.208),同样也减弱了醋酸甲羟孕酮对ES-2细胞nm23-H1蛋白表达的升调节作用(P=0.105)和抑制ES-2细胞穿过Transwell小室的能力(P=0.497),但差异均无统计学意义.结论 雌激素可通过激活磷酸化信号传导通路下调卵巢癌细胞nm23-H1蛋白的表达,参与卵巢癌的转移;而孕激素则可增加卵巢癌细胞nm23-H1蛋白的表达,抑制卵巢癌的转移。