Caracterização molecular de isolados clínicos de Leishmania braziliensis e Leishmania guyanensis e sua associação com a resposta terapêutica ao antimoniato de meglumina no Brasil

No Brasil, a leishmaniose cutânea (LC) constitui um importante problema de saude publica, apresentando cerca de 28.000 novos casos reportados anualmente pelo Ministerio da Saude. Sete especies de Leishmania causam a LC no Brasil, no qual a L. braziliensis e a L. guyanensis aparentam ser as mais prevalentes. Nos ultimos anos, vem sendo reportados casos clinicos que nao respondem ao tratamento. O fenomeno de falha terapeutica e complexo e dentre os varios fatores envolvidos esta o fenotipo de resistencia a drogas no parasito. Portanto, e fundamental identificar marcadores moleculares relacionados a resposta terapeutica ao antimoniato de meglumina na LC causada por isolados de L. braziliensis e L. guyanensis no Brasil. Neste estudo analisou-se isolados de L. braziliensis e L. guyanensis obtidos de pacientes com diferentes respostas terapeuticas, observando o polimorfismo das sequencias de DNA de regioes referentes aos genes AQP1, HSP70, MRPA e TR. Alem disso, atraves da tecnica de PCR em tempo real quantitativo, realizou-se uma analise do perfil de expressao de quatro genes alvo que codificam proteinas com funcao de transporte (AQP1 e MRPA) e metabolismo oxido-redutor (gama-GCS e TR). A variabilidade das sequencias estudadas sugere que L. braziliensis e mais heterogenea que L. gutanensis, corroborando com estudos anteriores. Uma analise de agrupamento hierarquico nao revelou uma associacao da resposta terapeutica com as sequencias em estudo. Atraves de um modelo de regressao logistica multiplo foi observado um polimorfismo na posicao 1735 do gene HSP70 com chance 7,3 vezes maior de que isolados de L. braziliensis que apresentem uma guanina ao inves de uma adenina estejam associados a falha terapeutica. Tambem, foram observadas varias mutacoes nao sinonimas nos genes em estudo que podem promover alteracoes na estrutura e atividade da proteina e, portanto, estarem relacionadas ao fenotipo de resistencia a drogas em Leishmania. O perfil de expressao genica observado revelou que a diferenca entre as fases de crescimento de promastigotas em estudo nao foi informativo. Entao, considerando-se apenas a especie e a resposta terapeutica, foi observado que o gene y-GCS esta superexpresso em isolados de falha terapeutica em L. guyanensis, indicando o potencial deste gene para ser utilizado no prognostico da leishmaniose cutânea. Portanto, o presente trabalho enaltece que a diversidade fenotipica em Leishmania esta alem das informacoes presentes no genoma, podendo ser em parte explicada pelos diferentes niveis de expressao genica observado entre os parasitos.