造血干/祖细胞遗传学修饰对4-氢过氧化环磷酰胺、长春新碱和柔红霉素的联合抗性(英文)

目的：探讨经醛脱氢酶基因（ALDH－3）和多药耐药基因（MDR1）遗传学修饰的人外周血造血干／祖细胞能否同时增强活性环磷酰胺（4－HC）和MDR1基因靶药的抗性。方法：构建同时含ALDH－3和MDR1双耐药基因的逆转录病毒表达质粒G1Na-ALDH3-IRES-MDR1,经电穿孔导入PA317包装细胞，将免疫磁珠分离系统（MACS）分离纯化后的人外周血CD34^+细胞用含有ALDH－3和MDR1双耐药基因重组病毒的上清感染，用PCR、RT－PCR、Southern blot、Northern blot、ACS和MTT等方法检测外源ALDH－3与MDR1基因在CD34^+细胞中的转移和表达。结果：用PCR与酶切分析法鉴定了双顺反子逆转录病毒载体构建的正确性，双耐药基因已整合入转染靶细胞中基因组，并获得有效表达，应用集落计数测定基因转导效率为18％。巢式PCR及补救分析均未检测到辅助病毒存在。经双耐药基因修饰的CD34^+造血干／祖细胞对4－HC的IC50较对照组提高4．5倍，对多药耐药基因靶药（长春新碱和柔红霉素）的IC50较未转染细胞分别高6．6和7．8倍。结论：逆转录病毒载体介导双耐药基因转导外周血造血干／祖细胞高效共表达可降低联合化疗骨髓毒性。