苏云金芽胞杆菌BkdR和CcpA对 bkd 基因簇的转录调控

目的通过分析苏云金芽胞杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）转录调控因子BkdR和多效调控因子CcpA对亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸代谢基因簇bkd的转录调控，明确bkd基因簇的转录调控机制。 方法通过β-半乳糖苷酶活性测定分析bkd基因簇启动子的诱导转录活性，采用同源重组技术敲除Bt HD73菌株的ccpA基因，通过融合His标签的方法在大肠杆菌中表达纯化BkdR和CcpA蛋白，通过凝胶阻滞实验明确BkdR和CcpA蛋白与bkd基因簇启动子的结合作用。 结果亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸可诱导bkd基因簇启动子Pptb的转录活性。Pptb的诱导活性在bkdR突变体中明显降低，而在ccpA突变体中明显上升。BkdR和CcpA蛋白与Pptb均有结合作用。 结论bkd基因簇的转录活性受BkdR正调控，而受CcpA负调控。