一步法多重RT-PCR检测新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒和传染性法氏囊病病毒方法的建立和应用

根椐GenBank中登录的新城疫病毒（NDV）、H9亚型禽流感病毒[AIV（H9）]和传染性法氏囊病病毒（IBDV）基因序列，分另q设计3对引物，在建立各病毒单项一步法RT—PCR技术的基础上，优化多重RT-PCR反应条件，建立了3种病毒的一步法多重RT—PCR检测方法，用这3对引物对同一样品中的NDV、AIVfH9）和IBDV核酸模板进行多重RT-PCR扩增，结果可同时扩增NDV的466bp、AIV（H91的685bp和IBDV的244bp的特异性片段，而对其他4种病原的扩增结果均为阴性。敏感性测定结果表明，该多重RT—PCR技术能检出10pg的NDV、10pg的AIV（H9）和1pg的IBDV模板。用53份临床病料对本研究多重RT—PCR技术和单项RT—PCR技术进行对比验证，结果显示，两者的总符合率为100％。表明建立的一步法多重RT—PCR检测方法，具有特异、快速及准确的特点，可用于对这3种病毒的同时检测和鉴别诊断。