植物雌激素通过缺氧诱导因子-1α与核因子-κB下调缺氧肺泡上皮细胞膜联蛋白A1的表达

目的从人肺泡上皮细胞甲酰肽受体激动剂——膜联蛋白A1（Annexin A1，AnxAl）的表达变化，探讨植物雌激素影响缺氧肺部炎症浸润的机制。方法人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549）接种于60mm培养皿中常规培养，待培养皿中细胞长满约70％，根据是否用药分为：对照组（溶剂DMSO对照）、染料木黄酮（genistein，Gen）组、大豆苷元（daidzein，DD）组，每组细胞再根据是否缺氧再分为常氧组（N）、缺氧组（H）。Gen组、DD组于缺氧处理前分别加入Gen及DD，终浓度均为15μmol／L。缺氧组细胞置于缺氧培养箱（1％O2）24h。取细胞培养上清及细胞裂解离心上清，结合甲酰肽受体特异性抑制剂tBoc2，通过趋化实验，检测其甲酰肽受体激动活性。用Westernblot分析AnxAl、缺氧诱导因子-1（It（HIF-1α）、核因子-κB（NF-κB）在蛋白水平的变化，用RT^2-PCR法分析其mRNA水平的变化。结果缺氧后的细胞冻融上清及培养上清趋化活性显著高于常氧组（P〈0．05），而植物雌激素处理后，两种上清的趋化活性均显著高于对照组（P〈0．05）。Westernblot与RT2-PCR检测结果显示，缺氧组AnxAl在蛋白水平和mRNA水平均高于常氧组（P〈0．05），两种植物雌激素不同程度地削弱了缺氧对AnxAl的上调效果，同时对HIF-1α、NF-κB的蛋白水平也产生同样的影响。结论植物雌激素削弱了缺氧对AnxAl基因表达的上调效应，其机制与HIF-1α、NF-κB信号途径有关。