RNA干扰技术抑制人内皮细胞非肌肉肌球蛋白重链IIA（MYH9）表达的研究

目的：构建人MYH9（非肌肉肌球蛋白重链ⅡA）的siRNA表达体系，抑制原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）MYH9基因的表达。方法：针对人MYH9基因序列，构建siRNA表达质粒，通过酶切和测序鉴定确定其序列正确性。分别转染重组质粒pGCsi-MYH9-1／2／3至HUVEC细胞，通过半定量lit-PCR和蛋白质印迹，分别检测在转染后24h、48h、72hMYH9在mRNA转录水平及蛋白表达的变化。结果：在构建的3种重组质粒中，pGCsi-MYH9.2、pGCsi-MYH9-3在转染后24h均表现出一定的干扰作用，转染后48h干扰作用最强，转染后72h干扰作用减弱；pGCsi-MYH9-3的干扰作用最明显，转染后48h，能明显下调HUVEC的MYH9蛋白表达，抑制率平均可达71.2％，此时MYH9基因mRNA转录明显减少，抑制率为86.5％。结论：在转染后48hpGCsi-MYH9-3可明显抑制HUVEC细胞内源MYH9的表达，为进一步研究MYH9在相关疾病中的功能奠定基础。