酸敏感钾通道-3真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

目的：构建酸敏感钾通道-3（TASK3）的真核表达载体,通过转染SH-SY5Y细胞建立稳定表达的细胞株。方法：将TASK3亚克隆至p EGFP-N1质粒上,构建重组质粒p EGFP-TASK3,利用X-fect试剂盒将其转染至SHSY5Y细胞中,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达TASK3-e GFP的细胞株;Western blot和激光共聚焦检测TASK3-e GFP的表达及细胞内定位;不同p H值（7.0、6.7、6.4、6.1）作用稳定表达细胞株24 h后,CCK-8检查细胞活力。结果：重组真核表达载体构建正确,获得了TASK3-e GFP稳定表达细胞株。不同p H值作用野生型和稳定表达细胞株24 h后,两组细胞的存活率随着p H值降低而显著降低（P〈0.05）。相同p H值下（除p H 7.0）,稳定表达细胞存活率较野生型细胞显著升高（P〈0.05）。结论：成功构建p EGFP-TASK3真核表达载体,建立了稳定表达TASK3-e GFP的SH-SY5Y细胞株,该细胞可为研究TASK3的功能奠定基础。