Análise genômica funcional do Trypanosoma cruzi submetido a diferentes tipos de estresse

A diferenciacao dos epimastigotas (formas replicativas e nao-infectivas) em tripomastigotas metaciclicos (formas nao-replicativa e infectivas) e o processo denominado metaciclogenese. Um evento essencial para a metaciclogenese, que pode ser mimetizado in vitro, e o estresse nutricional que os parasitas enfrentam nas porcoes posteriores do tubo digestivo do inseto vetor. Importantes mudancas no programa de expressao genica ocorrem durante o estresse e desempenham um papel fundamental nas mudancas morfologicas e fisiologicas observadas durante a metaciclogenese. No entanto, poucas informacoes estao disponiveis em relacao a capacidade e diferentes condicoes de estresse em disparar a metaciclogenese e, tambem, sobre os genes envolvidos na regulacao dessas respostas. Para tanto, foi realizada uma analise comparativa das diferentes condicoes estresse (aumento temperatura, diminuicao do pH e o estresse nutricional), em experimentos de metaciclogenese in vitro a fim de avaliar a capacidade de diferenciacao do parasita diante de tais condicoes. Foi observado que todos os parasitas submetidos as condicoes de estresses sao capazes de se diferenciar, entretanto, os parasitas provenientes dos estresses de pH e temperatura sofrem um retardo no disparo da metaciclogenese, porem esta diferenca e minimizada ate o final do processo. Para comparar as propriedades biologicas dos tripomastigotas metaciclicos originados de cada condicao de estresse, foram feitos ensaios de infeccao em celulas Vero e camundongos Swiss. Foi possivel constatar que todos os ripomastigotas foram capazes de infectar as celulas Vero, assim como, infectar os camundongos. Para investigar a expressao dos genes foi utilizada a tecnologia de microarranjos. Foi selecionado um conjunto de 32 genes especificamente expressos nos tipos de estresse estudados. Para os genes selecionados foram realizadas analises quantitativas pela tecnica de PCR em tempo real (RT-PCR) que validaram os dados de...epimastigotas.