Clonage et caractérisation de gènes différentiellement exprimés chez la levure pathogène opportuniste Candida lusitaniae au cours de la pseudofilamentation

Candida lusitaniae est une levure saprophyte qui peut se comporter comme pathogene opportuniste chez des personnes immunodeprimees. Comme d'autres especes du genre Candida, cette levure est capable de passer d'un etat blastospore a un etat morphologique plus complexe, le pseudofilament. L'objectif de notre travail etait de determiner s'il existait une relation entre la pseudofilamentation et la virulence, et puis de cloner des genes differentiellement exprimes au cours de cette transition morphogenetique. Nous avons tout d'abord montre que la pseudofilamentation in vitro etait declenchee par un stress nutritionnel, tel qu'une carence en ion ammonium et en glucose. La selection et l'analyse genetique de mutants deficients pour la pseudofilamentation, a montre que deux mutations dans deux genes differents etaient necessaire pour conferer un phenotype stable. Un mutant deficient pour la pseudofilamentation etait avirulent chez la souris par rapport a la souche sauvage dont il etait issu. Les etudes histologiques et microbiologiques des reins de souris infectees ont indique que la forme pseudofilament n'etait pas differenciee pour coloniser les tissus, et que l'avirulence du mutant etait due a des capacites d'adherence reduites, ce qui a ete confirme par des experiences d'adherence in vitro. Nos resultats suggerent que la pseudofilamentation en elle-meme n'a probablement pas de role direct dans la virulence de C. Lusitaniae, mais qu'elle contribue par l'intermediaire des facteurs associes. Par une technique d'hybridation soustractive nous avons clone et identifie huit genes surexprimes chez la souche sauvage en phase de pseudofilamentation et 4 genes surexprimes chez le mutant MFs1 bloque au stade blastospore. La plupart des proteines exprimees au cours de la pseudofilamentation chez les sauvages, sont des enzymes du metabolisme energetique glycolytique et glyoxylique ce qui montre le role important de l'energie dans la transition morphologique chez C. Lusitaniae. Un gene specifique du regne fongique, le facteur 3 d'elongation de la traduction a egalement ete isole. Les genes isoles, chez le mutant, en particulier, un transporteur de glucose a haute affinite, laisse supposer que la souche est affectee dans la perception de son environnement nutritionnel. Deux genes surexprimes en phase pseudofilamentation ont ete clones et caracterises. Il s'agit du gene MLS1 codant une enzyme cle du cycle glyoxylique, et le gene TEF3 codant pour le facteur 3 d'elongation. L'inactivation du gene MLS1 a ete realisee. Elle provoque un defaut dans croissance de la levure sur les sources de carbone non fermentables, mais n'a aucun effet sur la pseudofilamentation. En revanche, nos resultats ont clairement demontre que l'expression du gene TEF3 etait reprimee au stade blastospore et qu'elle etait fortement induite en phase de pseudofilamentation sur milieu solide. Le gene TEF3, specifique du regne fongique, et surexprime au cours de la pseudofilamentation, joue un role dans la virulence, constitue donc une cible de choix pour le developpement de nouveaux antifongiques.