基于“升降开阖”通玄府的引经药诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化

背景：地黄饮子诱导的骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能恢复有明显的影响。目的：探讨应用＂升降开阖＂通玄府的引经报使药（升麻、牛膝分别置换薄荷）地黄饮子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,并进一步研究在骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的调节作用。方法：取4周龄健康清洁级SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法体外培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测第3代细胞表面的骨髓基质标志CD90和造血细胞标志CD45。取第3代细胞,根据诱导条件不同分为4组：空白对照组、地黄饮子组、牛膝组、升麻组,空白对照组只用含体积分数为1%胎牛血清的DMEM/F12培养,后3组用地黄饮子含药血清、以牛膝为药引子的地黄饮子含药血清、以升麻为药引子的地黄饮子含药血清＋体积分数为1%胎牛血清＋DMEM/F12培养,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,诱导7 d后,采用免疫细胞化学法和Western blot检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子m RNA的表达。结果与结论：第3代骨髓间充质干细胞大致呈单一的长梭形或扁平形,紧密漩涡样排列生长,流式细胞仪示CD90表达高达98%,而CD45表达仅1.3%。诱导7 d后,升麻组、牛膝组和地黄饮子组的细胞收缩变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,表现出典型的神经元样细胞形态,而空白对照组变化不明显。免疫组化染色显示牛膝组及升麻组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白表达均高于地黄饮子组,牛膝组高于地黄饮子组,升麻组高于牛膝组,差异均有显著性意义（P〈0.05）。Western blot检测结果与免疫细胞染色结果一致。RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子m RNA改变类似于相�