融合蛋白 GSH-bFGF 的构建、表达及体外活性检测

目的：设计构建和表达新型融合蛋白谷胱甘肽－碱性成纤维细胞生长因子（Glutathione-basic fibroblast growth factor，GSH-bFGF），并检测其体外抗氧化、抗衰老能力．方法：采用 RT-PCR，酶切，连接，转化等分子克隆技术构建新型融合蛋白 GSH-bFGF，并通过镍柱亲和层析、阳离子交换层析纯化该目的蛋白．通过 CCK-8试剂盒检测GSH-bFGF 对鼠源成纤维细胞 NIH-3T3的促增殖活性．同时，经总抗氧化检测试剂盒检测 GSH-bFGF 的抗氧化能力．结果：克隆表达并纯化获得融合蛋白 GSH-bFGF．CCK-8促增殖结果显示质量浓度为20 ng／mL 的 GSH-bFGF 可显著促进鼠源成纤维细胞 NIH-3T3增殖．体外抗氧化结果显示 GSH-bFGF 有显著的抗氧化活性，纯化得到的 GSH-bFGF 蛋白的 GSH 浓度约为（0.06±0.02）μmol／L，抗氧化能力为（0.56±0.23）mmol／g．结论：新型融合蛋白 GSH-bFGF 有显著的体外促增殖能力及抗氧化活性．